進口elisa檢測試劑盒中陰性本底的形成原因分析
點擊次數(shù)：1205 更新時間：2022-03-28
在
進口elisa檢測試劑盒實驗中，偶爾會遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應(yīng)導致的結(jié)果。
首先我們要知道什么是基質(zhì)，基質(zhì)是指樣品中目標分析物以外的部分。由于基質(zhì)成分會對分析過程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱為基質(zhì)效應(yīng)，這是該產(chǎn)品開發(fā)和使用中需要避開的雷。
今天我們就談?wù)勥M口elisa檢測試劑盒中陰性本底的形成原因。酶聯(lián)固相免疫實驗中，尤其在簡介ELISA法中，經(jīng)常會碰到陰性本底的問題。主要是本底過高和不同標本的本底值差異較大。本底或稱背景，是ELISA中的非特異性顯色。底物未經(jīng)過酶作用而呈現(xiàn)的顏色稱為空白。底物液如配制不當會出現(xiàn)一定的空白值。這個空白值只要不太高(A<0.05)，可從個測定值中減除，并不影響實驗結(jié)果。這里研究的是不含待測抗原或抗體的陰性標本在ELISA中出現(xiàn)的本底。從理論上講，只有陽性標本z終才能引出顯色反應(yīng)，在以下情況。
進口elisa檢測試劑盒在酶免疫測定中，其特點是利用固相載體作為分離游離和結(jié)合的酶結(jié)合物的手段。固相載體與吸附在其上的抗原會抗體形成固相抗原或固相抗體，即免疫吸附劑。通常所用的固相載體聚苯乙烯其表面主要是疏水基團，通過疏水鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合。之中吸附式物理性的非特異性吸附，雖然蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等對吸附的量有一定的影響，但總的來說各種蛋白質(zhì)均能吸附在聚苯乙烯載體的表面。因此除在包被時有目的地使抗原或抗體吸附在載體上，在各個步驟中均有可能發(fā)生干擾物質(zhì)的吸附，使z終產(chǎn)生與受檢抗原-抗體反應(yīng)無關(guān)的顯色，這是形成本底的主要原因。
