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大鼠Janus激酶2elisa檢測試劑盒操作說明
點擊次數(shù):1078 更新時間:2019-11-29

                                   大鼠Janus激酶2elisa檢測試劑盒操作說明

 

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間接法(檢測未知抗體):

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。

2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)

3、加酶標抗體:于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

雙抗體夾心法:

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-1a0ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。

2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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